北京體視熒光顯微鏡2018報(bào)價(jià)
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在熒光顯微鏡的基本原理是細(xì)胞成分有熒光劑的幫助的非常具體的可視化。這可以是熒光蛋白 - 例如綠色熒光蛋白 - 基因與感興趣的蛋白質(zhì)。如果克隆是不可能的 - 例如組織學(xué)標(biāo)本中 - 這是需要使用其他技術(shù)，如免疫熒光染色來(lái)可視化目的蛋白質(zhì)。用于此目的的抗體的利用，這是可以直接或間接地連接到不同的熒光染料和結(jié)合到適當(dāng)?shù)哪繕?biāo)結(jié)構(gòu)。此外，與熒光染料的徠卡顯微鏡的幫助下，不僅限于蛋白，但它也提供了機(jī)會(huì)染色核酸，多糖和其他結(jié)構(gòu)?？梢詸z測(cè)甚至非生物物質(zhì)，如鈣離子。本文介紹了常用的熒光劑。
熒光免疫
在熒光顯微鏡有兩種方式來(lái)可視化你的目標(biāo)蛋白。無(wú)論是與一個(gè)固有熒光信號(hào)的幫助下 - 這意味著通過(guò)克隆，因此基因連接的熒光蛋白與靶蛋白?；蚪柚鸁晒鈽?biāo)記的特異性結(jié)合到感興趣的蛋白質(zhì)的抗體。對(duì)于一些生物的問(wèn)題是比較有用的，甚至需要進(jìn)行后者。在組織學(xué)樣品的情況下，例如，它不可能使用的，因?yàn)樵谝话愕臉悠繁粡钠渲胁怀钟腥魏螣晒獾鞍椎纳飦?lái)源的熒光蛋白。此外，如果一個(gè)有效的抗體可用，免疫比熒光蛋白技術(shù)快得多，是你要克隆的興趣和轉(zhuǎn)染的DNA的基因插入到適當(dāng)?shù)募?xì)胞。熒光蛋白的另一個(gè)缺點(diǎn)在于身為蛋白質(zhì)本身的性質(zhì)。有了它，它們具有可導(dǎo)致功能障礙或誤解關(guān)于感興趣的附著蛋白的細(xì)胞內(nèi)特定蛋白質(zhì)性的特點(diǎn)。然而，應(yīng)當(dāng)認(rèn)為，使用熒光蛋白是通常選擇的方法來(lái)觀察活細(xì)胞。
免疫熒光法利用抗體與其抗原的非常特異性結(jié)合親和力的。這可以有兩種不同的外觀。最簡(jiǎn)單的方法是使用一種被結(jié)合到感興趣的蛋白的熒光標(biāo)記的抗體。這就是所謂的直接免疫熒光。
在大多數(shù)情況下，有兩種形式的抗體的使用。第一個(gè)結(jié)合靶蛋白并沒(méi)有熒光標(biāo)記本身（第一抗體）。但是，第二個(gè)（第二抗體），其結(jié)合第一抗體特異性帶有熒光染料。這種方法被稱(chēng)為間接免疫熒光和具有若干優(yōu)點(diǎn)。一方面有一個(gè)放大的效果，因?yàn)槎嘤谝粋€(gè)的第二抗體結(jié)合于一個(gè)第一抗體。另一方面，沒(méi)有必要所有的時(shí)間標(biāo)記每個(gè)抗體對(duì)您喜歡的蛋白與熒光染料而使用的商業(yè)熒光標(biāo)記的第二抗體。廣泛使用的熒光染料的免疫是FITC，TRITC或都提到了以下幾個(gè)Alexa的Fluor?染料。
異硫氰酸熒光素（FITC）是有機(jī)熒光染料仍然在免疫熒光和流式細(xì)胞術(shù)使用。它的激發(fā)/發(fā)射峰在517分之495nm和可耦合到不同的抗體，其反應(yīng)性異硫氰酸酯基，其上結(jié)合的蛋白質(zhì)的氨基，巰基，咪唑基，酪氨?；螋驶膸椭?。它的基本形式 - 熒光素 - 具有332克/摩爾的摩爾質(zhì)量，并經(jīng)常被用來(lái)作為熒光示蹤劑。 FITC（388克/摩爾），這是用于熒光顯微鏡和服務(wù)為原點(diǎn)進(jìn)行進(jìn)一步的熒光染料類(lèi)的AlexaFluor?488第一的染料之一。其熒光活性是由于其大的共軛芳族電子系統(tǒng)，它是由光的藍(lán)色光譜激發(fā)。
