乳制品中三聚氰胺的高效液相色譜檢測法
三聚氰胺（Melamine）是一種重要的三嗪類含氮雜環(huán)有機化工原料，主要用于生產(chǎn)三聚氰胺-甲醛樹脂，廣泛用于木材加工、塑料、涂料、造紙、紡織、皮革等行業(yè)，為白色晶體。三鹿奶粉事件引發(fā)了對三聚氰胺檢測的廣泛關(guān)注，國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局和國家標準化管理委員會相繼發(fā)布了《原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測方法》（GB/T22388-2008）和《原料乳中三聚氰胺快速檢測 液相色譜法》（GB/T22400-2008）的國家標準。本文參考了以上標準并進行配制條件優(yōu)化，建立了乳制品中三聚氰胺的高效液相色譜檢測法，前處理簡單，檢測限、精密度、重現(xiàn)性以及回收率均符合國家標準。
1 實驗部分
1.1 儀器與試劑
501-HPLC高效液相色譜儀（含UV501紫外-可見檢測器1臺，P501高壓恒流泵1臺，杭州賽析科技有限公司）；DT-230A色譜柱溫箱；FA2004分析天平（上海舜宇恒平科學儀器有限公司）；TGL-16G-A離心機（上海安亭科學儀器廠）；三聚氰胺標準品(>99%，上海安譜)；辛烷磺酸鈉(色譜純，北京百靈威)；磷酸(分析純)、乙腈(色譜純，美國Tedia)、純凈水(杭州娃哈哈)。
1.2 標準品溶液配制
精密稱取三聚氰胺標準品，溶于50％的甲醇水溶液，配制稱1.422mg/ml的標準儲備液，于4℃避光保存。根據(jù)實驗需要，用流動相逐級稀釋成適當濃度的標準工作液。
1.3 樣品前處理
稱取2g酸奶樣品與50ml具塞離心管中，加入乙腈：水＝50：50混合溶液15ml，充分混勻后超聲提取15min。取提取液250ul，加入0.1mol/l鹽酸750ul，混勻，以12000r/min離心5min，取上清液，0.22um濾膜過濾，作為HPLC測定溶液。
1.4 色譜條件：
色譜柱：Globalsil C18 5μm(ID4.6mm×250mm)
流動相：乙腈/緩沖鹽=15/85（緩沖鹽：10mM辛烷磺酸鈉水溶液，含0.1％磷酸）
流速：1.0ml/min
波長：240nm
溫度：40℃
進樣量：20μl
2 實驗結(jié)果
2.1 精密度實驗
取濃度為0.569μg/ml三聚氰胺標準工作液，按上述色譜條件，連續(xù)進樣5次，以各成分峰面積計算RSD(%)，所得結(jié)果如表1所示：保留時間相對標準偏差（RSD）為0.23％，峰面積RSD為0.57％。
表1 精密度實驗
NO.
|
Retention time（min）
|
Peak High
|
Peak Area
|
1
|
11.933
|
289
|
4216.8
|
2
|
11.990
|
290
|
4264.2
|
3
|
11.928
|
287
|
4246.0
|
4
|
11.927
|
287
|
4242.8
|
5
|
11.923
|
284
|
4218.6
|
RSD(%)
|
0.23
|
0.82
|
0.57
|
圖1 三聚氰胺標準品
Spiked(mg/kg)
|
Recovery(%)
|
RSD(%)
|
35.0
|
87.2
|
1.37
|
圖2 空白酸奶樣品
圖3 加酸奶樣品
相關(guān)資料：飼料中三聚氰胺液相色譜儀
