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產(chǎn)品簡介
RAW 264.7
RAW 264.7
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上架日期:2024-04-30 15:10:36
產(chǎn)地:本地
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詳細說明

    RAW 264.7

    RAW 264.7-LUC(小鼠單核巨噬細胞白血?。?/strong>

    產(chǎn)品基本信息

    細胞名稱:RAW 264.7-LUC(小鼠單核巨噬細胞白血病)

    種屬來源:小鼠

    組織來源:亞伯森鼠白血病病毒誘發(fā)腫瘤;腹水

    細胞形態(tài):單核細胞,巨噬細胞

    生長特性:貼壁生長

    培養(yǎng)基::DMEM+10?S+PS

    生長條件:氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃

    傳代方法:1:2至1:3,每周 2-3次

    凍存條件:無血清凍存液,液氮儲存

    支原體檢測:無

    注:該細胞容易分化,不建議用消化,或者密度過高才傳代。

    注:該細胞puro藥篩濃度為0.5ug/ml,培養(yǎng)過程中可不用再添加puro,如若擔心抗性隨著傳代時間降低,可定期用0.2ug/ml濃度puro維持。加藥需在細胞狀態(tài)良好情況下。

    細胞培養(yǎng)操作

    1)復蘇細胞:將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min,棄去上清液,加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤? cm皿中,加入約4 mL*培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第三天換液并檢查細胞密度。

    2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

    a、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1次。

    b、加2 mL*培養(yǎng)基于培養(yǎng)瓶中,使培養(yǎng)基浸潤所有細胞,然后輕輕吹下細胞,將吹下來的細胞及細胞懸液收集到無菌離心管中,1000 rpm離心5 min,棄去上清液,補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

    c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

    3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例;

    a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液,裝入無菌離心管中,1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,進行細胞計數(shù)。

    b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液,使細胞密度5×106~1×107/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細胞懸液,注意凍存管做好標識。

    c、將凍存管放入-80℃冰箱,24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

    培養(yǎng)注意事項

    1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,干冰運輸?shù)募毎麢z查干冰是否*揮發(fā),細胞是否解凍,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

    2. 仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關(guān)信息,如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等,確保細胞培養(yǎng)條件一致,若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題,責任由客戶自行承擔。

    3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題,部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,是正?,F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置2-4h。

    4. 貼壁細胞可以消化,懸浮細胞直接混勻收集細胞,900 rpm-1000 rpm離心3 min,棄上清。加5 mL PBS重懸細胞,再900 rpm-1000 rpm離心3 min,,用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞,并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中,置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

    5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

    6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑?,個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,告知細胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。


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